大鼠二肽基肽酶Ⅳ(DPPⅣ)ELISA試劑盒

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ELISA法是免疫診斷中的一項(xiàng)新技術(shù)，現(xiàn)已成功地應(yīng)用于多種病原微生物所引起的傳染病、寄生蟲病及非傳染病等方面的免疫診斷。也已應(yīng)用于大分子抗原和小分子抗原的定量測(cè)定，根據(jù)已經(jīng)使用的結(jié)果，認(rèn)為ELISA法具有靈敏、特異、簡(jiǎn)單、快速、穩(wěn)定及易于自動(dòng)化操作等特點(diǎn)。不僅適用于臨床標(biāo)本的檢查，而且由于一天之內(nèi)可以檢查幾百甚至上千份標(biāo)本,因此，也適合于血清流行病學(xué)調(diào)查。本法不僅可以用來(lái)測(cè)定抗ti，而且也可用于測(cè)定體液中的循環(huán)抗原，所以也是一種早期診斷的良好方法。因此ELISA法在生物醫(yī)學(xué)各領(lǐng)域的應(yīng)用范圍日益擴(kuò)大，

免責(zé)聲明

1. 試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實(shí)驗(yàn)或人體實(shí)驗(yàn)，否則所產(chǎn)生的一切后果，由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)，本公司概不負(fù)責(zé)。

2. 嚴(yán)格按照說(shuō)明書操作，實(shí)驗(yàn)者違反說(shuō)明書操作，后果由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)。

3. 產(chǎn)品特點(diǎn)

一、高效、靈敏、特異的抗ti；

二、穩(wěn)定的重復(fù)性和可靠性；

三、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相載體；

四、適用血清、血漿、組織勻漿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等等多種標(biāo)本類型；

五、節(jié)省實(shí)驗(yàn)經(jīng)費(fèi)。

elisa試劑盒回收率是反應(yīng)待測(cè)物在樣品分析過(guò)程中的損失的程度，損失越少，回收率越高，如果作標(biāo)液1PPM，就是1毫克/升，而作出標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)為0.99毫克/升，就是說(shuō)你的回收率是99%，這個(gè)與真實(shí)成分有密切的關(guān)系，說(shuō)明方法的準(zhǔn)確度。比如水中總無(wú)機(jī)氯含量測(cè)定，樣品水中含有無(wú)機(jī)氯20mg/L，取100mL被測(cè)水樣品，加入0.1mL濃度為10mg/mL的含無(wú)機(jī)氯標(biāo)準(zhǔn)樣品，測(cè)定時(shí)忽略體積變化，如果測(cè)定出樣品中無(wú)機(jī)氯為29.8mg/L，則認(rèn)為回收率為99%。

大鼠二肽基肽酶Ⅳ(DPPⅣ)ELISA試劑盒

組成結(jié)構(gòu)

1、血清：操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)du素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血紅細(xì)胞迅速小心地分離。

2、血漿：EDTA、檸檬suan鹽、肝素血漿可用于檢測(cè)。1000×g離心30分鐘去除顆粒。

3、細(xì)胞上清液：1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4、組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液。

5、保存：如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70℃保存，避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測(cè)前先離心或過(guò)濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

試劑盒成分

1 預(yù)包被板: 抗小鼠白介素-6兔子IgG,親合純化 96T

2 酶標(biāo)記抗ti: (30倍濃縮)HRP標(biāo)記抗小鼠白介素-6兔子IgG,親合純化 0.4mL x 1

3 標(biāo)準(zhǔn)品: 重組小鼠白介素-6 0.5mL x 2

4 EIA緩沖液: 含1% BSA, 0.05%吐溫20 BPS 30mL x 1

5 標(biāo)記抗ti稀釋液: 含1% BSA, 0.05%吐溫20 BPS 12mL x 1

6 顯色劑: TMB底物液 15mL x 1

7 終止液: 1N硫suan 12mL x 1

8 濃縮洗滌液: (40倍濃縮) 含1% BSA, 0.05%吐溫20 BPS 50mL x 1 操作說(shuō)明 1實(shí)驗(yàn)所需器材(但試劑盒沒(méi)有提供) 酶標(biāo)儀(450nm) 微移液管及其吸嘴 量筒及燒杯 去離子水 冰箱(4°C) 坐標(biāo)紙(log/log) 吸水紙 試管(用于標(biāo)準(zhǔn)品稀釋) 溫育箱(37°C ± 1°C) 洗瓶 (用于洗板) 一次性試劑管(用于濃縮酶標(biāo)記抗ti和顯色劑)

常用方法及原理如下：

1. 夾心法：

夾心法常用于檢測(cè)大分子抗原，一般的操作步驟為:

a. 將具有專一性的抗ti固著（coating）于塑膠孔盤上，完成后洗去多余抗ti

b. 加入待測(cè)檢體，檢體中若含有待測(cè)的抗原，則其會(huì)與塑膠孔盤上的抗ti進(jìn)行專一性鍵結(jié)

c. 洗去多余待測(cè)檢體，加入另一種對(duì)抗原專一的一次抗ti，與待測(cè)抗原進(jìn)行鍵結(jié)

d. 洗去多余未鍵結(jié)一次抗ti，加入帶有酶的二次抗ti，與一次抗ti鍵結(jié)

e. 洗去多余未鍵結(jié)二次抗ti，加入酶底物使酵素呈色，以肉眼或儀器讀取呈色結(jié)果

原理：針對(duì)抗原分子上2個(gè)不同抗原決定簇的單克隆抗ti分別作為固相抗ti和酶標(biāo)抗ti，將大分子抗原分別制備固相抗原和酶標(biāo)抗原結(jié)合物。

2. 間接法

間接法常用于檢測(cè)抗ti，一般的操作步驟為：

a. 將已知的抗原固著于塑膠孔盤上，完成后洗去多余的抗原。

b. 加入待測(cè)檢體，檢體中若含有待測(cè)的一次抗ti，則其會(huì)與塑膠孔盤上的抗原進(jìn)行專一性鍵結(jié)。

c. 洗去多余待測(cè)檢體，加入帶有酶的二次抗ti，與待測(cè)的一次抗ti鍵結(jié)。

d. 洗去多余未鍵結(jié)二次抗ti，加入酶底物使酶呈色，藉儀器（ELISA reader）測(cè)定塑膠盤中的吸光值（OD值），以評(píng)估有色終產(chǎn)物的含量即可測(cè)量待測(cè)抗ti的含量。

原理：利用酶標(biāo)記的抗抗ti以檢測(cè)已與固相結(jié)合的受檢抗ti。

3. 競(jìng)爭(zhēng)法

競(jìng)爭(zhēng)法是一種較少用到的ELISA檢測(cè)機(jī)制，一般用于檢測(cè)小分子抗原，其操作步驟為：

a. 將具有專一性的抗ti固著于塑膠孔盤上，完成后洗去多余抗ti

b. 加入待測(cè)檢體，使檢體中的待測(cè)抗原與塑膠孔盤上的抗ti進(jìn)行專一性鍵結(jié)

c. 加入帶有酶的抗原，此抗原也可與塑膠孔盤上的抗ti進(jìn)行專一性鍵結(jié)，由于塑膠孔盤上固著的抗ti數(shù)量有限，因此當(dāng)檢體中抗原的量越多，則帶有酶的抗原可鍵結(jié)的固著抗ti就越少，亦即，兩種抗原皆競(jìng)相與塑膠孔盤上抗ti鍵結(jié)，即所謂競(jìng)爭(zhēng)法之由來(lái)。

d. 洗去檢體與帶有酶的抗原，加入酶底物使酶呈色，當(dāng)檢體中抗原量越多，代表塑膠孔盤內(nèi)留下之帶有酶的抗原越少，顯色也就越淺。

e. 當(dāng)需要偵測(cè)無(wú)法獲得兩種以上單一性抗ti的抗原，或是不易得到足夠的純化抗ti以固著于孔盤上時(shí)，一般會(huì)考慮使用競(jìng)爭(zhēng)法ELISA。

常見問(wèn)題解析：

1、試劑的選擇：選擇優(yōu)良試劑大家都是知道的，但是在檢測(cè)之前還應(yīng)該提前半個(gè)小時(shí)將試劑拿到常溫下進(jìn)行解凍。

2、加樣中可能遇到的問(wèn)題。

3、洗板時(shí)容易造成誤差。

4、顯色問(wèn)題：使用了過(guò)期的顯色劑或者是顯色劑用過(guò)后放置時(shí)間太長(zhǎng)，都有可能造成顯色劑不顯色。

5、終止反應(yīng)：在加終止劑的時(shí)候由于傾倒速度快，產(chǎn)生氣泡，造成假陽(yáng)性結(jié)果，所以在倒終止劑的時(shí)候要緩慢倒。

6、讀板：讀板的時(shí)候首先應(yīng)該保證板的清潔干凈。

實(shí)驗(yàn)詳細(xì)操作程序

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.  設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；樣本孔加待測(cè)樣本50μL。

3.  樣本孔先加待測(cè)樣本10μL，再加樣ben稀釋ye40μL；空白孔不加。

4.  除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.  棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。

6.  每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。

訂購(gòu)說(shuō)明:

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